Mactube.ru

Рекламные материалы
0 просмотров
Рейтинг статьи
1 звезда2 звезды3 звезды4 звезды5 звезд
Загрузка...

Экспертиза днк это

ПЦР-тест

Полимеразная цепная реакция – что это такое, какие заболевания выявляет, в чем преимущества и недостатки анализа и что значат его результаты – в материале РИА Новости.

Анализ ПЦР

Полимеразная цепная реакция (ПЦР) – это метод молекулярно-генетической диагностики, позволяющий обнаружить в организме человека различные инфекционные заболевания. В его основе лежит многократное увеличение малых концентраций фрагментов РНК и ДНК. Полимеразная цепная реакция была изобретена в 1983 году американским биохимиком Кэри Муллисом. Он хотел добиться того, чтобы можно было создать множество копий ДНК за счет фермента ДНК-полимеразы, который участвует в ее репликации. За это Муллис получил Нобелевскую премию по химии. Известно, что еще в начале 1970-х годов похожий метод был представлен другим ученым, однако задумку так и не смогли реализовать. Позже анализ был значительно усовершенствован и широко используется в биологической, биохимической и медицинской практике.

Как работает ПЦР

Для проведения анализа необходимо сложное, современное оборудование.

PCR1.jpg

«Применяется специальный прибор, он называется амплификатор, в который помещается частица вируса или еще что-нибудь, содержащее РНК или ДНК, – рассказал РИА Новости кандидат медицинских наук, клинический фармаколог Андрей Кондрахин. – Дело в том, что РНК и ДНК достаточно маленькие, чтобы их определить, и понять есть ли в теле человека вредоносные микроорганизмы, поэтому делают ПЦР-тест. В большую машину кладут частичку вируса, но она его не распознает, затем добавляются специальные компоненты, праймеры, которые позволяют сделать большое количество этих цепочек РНК. Их становится так много, что машина начинает их «видеть». Даже если есть хоть самая маленькая РНК вируса, например, коронавируса, это позволяет создать множество копий инфекции, что помогает определить, присутствует она в организме или нет. Метод дает результат практически стопроцентной точности. Для определения COVID-19 есть отдельный праймер. Там находится большое число нуклеотидов, из которых строится будущая РНК. Она сначала разрушается, а потом заново выстраивается. Реакция называется цепной, потому что очень быстро это происходит. Как только копий становится много, сразу начинается считывание».

Применение ПЦР

ПЦР-тест обнаруживает наличие возбудителей вирусных заболеваний, когда другими методами этого сделать нельзя. Например, иммунологическими, бактериологическими и микроскопическими исследованиями. Также значительную роль играет фактор времени, потому что анализ делается довольно быстро по сравнению с другими.

«Метод применяется не только для вирусов, но и частичек ДНК, а также бактерий, – пояснил специалист. – Например, мы можем определить, к какому виду бактерия относится, например, к грамотрицательным или грамположительным».

Полимеразную цепную реакцию применяют в криминалистике, когда нужно сделать анализ ДНК с места преступления, его потом сравнивают с генетическим материалом подозреваемого. Также используется для установления отцовства или материнства, нахождения в организме человека вирусов и бактерий, выявления аллергии на некоторые лекарства или их токсичности.

Проведение ПЦР

Для анализа требуется ДНК- или РНК-матрицы, участки которых нужно скопировать, два праймера с необходимыми ферментами, термостабильная ДНК-полимераза, а также некоторые другие компоненты. Метод ПЦР выявляет любую ДНК или РНК живого или мертвого возбудителя. Для их определения используют особые праймеры, в которых содержатся вырожденные позиции РНК или ДНК.

PCR2.png

Подготовка материала

Этот этап чрезвычайно важен для проведения анализа ПЦР, потому что большинство ошибок, до 70% случаев, совершается именно во время пробоподготовки, что влияет на конечный результат анализа. Чтобы этого избежать, нужно правильно забрать материал для тестирования и подготовить его. Поэтому во многих лабораториях при заборе крови используются вакуумные системы, которые меньше травмируют человека и не допускают того, чтобы материал для анализа контактировал с окружающей средой или персоналом.

Какие биологические материалы исследуются

В исследовании обычно используются различные биоматериалы:

Читайте так же:
Личное имущественное право

– Моча. Такой анализ позволяет выявить инфекции мочеполового тракта у мужчин и мочевыделительных органов у женщин.

– Мокрота. Применяется для обнаружения туберкулеза и некоторых других заболеваний легких.

– Биологические жидкости – околоплодная, спинномозговая, суставная и т.д.

– Соскобы со слизистых оболочек, например, носа или ротоглотки. В основном применяется для обнаружения заболеваний, которые передаются половым путем, а также коронавируса.

– Кровь, сыворотка, плазма. Используются для определения вирусов ЦМВ (цитомегаловируса), ВИЧ, гепатитов B, C, D, G, герпеса, а также исследований человеческих генов.

– Биоптаты. Их забирают методом биопсии.

Преимущества и недостатки метода

ПЦР отличается от других исследований тем, что может обнаружить несколько разных возбудителей одновременно. Для него нужно сдать только один анализ, никаких дополнительных тестов не требуется.

«Преимуществом метода является то, что можно определить возбудителя в малом количестве, просто в мизерном, – объяснил клинический фармаколог. – Благодаря этому можно быстрее поставить диагноз, потому что мы знаем, какой именно микроорганизм начинает развиваться. В тесте пишется концентрация выявленных у ДНК и РНК микроорганизмов, если берется мазок из носа или ротовой полости, а также к какому классу они принадлежат. То есть присутствует четкое понимание, к какому типу относится возбудитель и каково его количество. Мало, много, либо его вообще нет в организме».

По словам Андрея Кондрахина, к одному из минусов теста относятся сложности при заборе материала:

«Самый первый недостаток метода – необходима абсолютная чистота в помещении, ближе к стерильности, потому что попадание даже мельчайших инородных объектов может дать неправильный результат из-за того, что чувствительность аппарата очень высокая. Сразу начнется увеличение концентрации этих частиц, которое машина может прочитать. Второе – чтобы пошла реакция, нужны специальные материалы, праймеры. Для каждой реакции есть свои праймеры – кусочки, из которых будут создаваться новые РНК. Тест небыстрый – по времени может занимать около суток. Кроме этого, нужен обученный, высокопрофессиональный персонал. Сами аппараты довольно громоздкие, хотя сейчас уже есть и установки меньшего размера. Но чем больше машина, тем больше она может прочитать. Это система не для мобильного использования».

Загрязнение материала для теста может произойти также, если при его транспортировке были допущены ошибки, из-за непригодности реагентов, попадании в них крови, клеток эпителия, большого количества слизи.

Разновидности ПЦР

ПЦР-тест бывает нескольких видов:

– ПЦР с обратной транскрипцией. Его применяют для амплификации РНК.

– Инвертированная ПЦР используется, если для анализа есть маленький участок последовательности ДНК или РНК.

– Вложенная ПЦР нужна для уменьшения побочных реакций, для этого в амплификатор помещают два праймера.

– Количественная ПЦР применяется для наблюдения за изменением цепной реакции.

– Ступенчатая ПЦР позволяет снизить связывание праймеров.

Кроме этого, есть асимметричная ПЦР и групп-специфическая ПЦР.

«Существует методика проведения ПЦР в реальном времени, – рассказал Андрей Кондрахин. – Это самый быстрый анализ, как говорится, здесь и сейчас. Его делают при помощи прибора, в котором есть картридж, определяющий только одну инфекцию, например, коронавирус. Кроме него аппарат ничего не видит, как и при обычном ПЦР, однако в таком случае результат можно получить намного быстрее».

Какие инфекции позволяет выявить

Полимеразная цепная реакция позволяет обнаружить у человека инфекционные заболевания, например:

– уреаплазмоз половых органов;

– наличие раковых клеток;

Также тестирование помогает выявить наследственную предрасположенность человека к некоторым заболеваниям и оценить гормональный фон.

ПЦР-тест на COVID-19

Для ПЦР-теста на коронавирус у человека берется мазок из носа и ротоглотки. Во время пандемии его рекомендуют сдать всем, кто болеет ОРВИ, гриппом, пневмонией и т.д. Берут материал для анализа амбулаторно, также специалист может выехать на дом. Согласно требованиям, пациента выписывают после двух отрицательных тестов на наличие инфекции. ПЦР-тесты могут давать ложноположительный или ложноотрицательный результат, в таком случае необходимо повторное исследование.

Читайте так же:
Делится ли подаренное имущество при разводе

Как подготовиться к сдаче анализа

«Специальной подготовки вообще не требуется, разве что не принимать пищу за три часа (минимум) перед забором материала, если будут брать мазок из ротовой полости. Частички еды могут извратить результат. Достаточно прополоскать рот с водой и идти на анализ», – пояснил специалист.

Перед мазком также не рекомендуется пить кофе, чай, иные напитки, чистить зубы, полоскать рот освежающими смесями, жевать жевательную резинку, курить. Нос нельзя промывать, закапывать туда капли или мазать лекарствами. Если берут кровь, то ее необходимо сдавать натощак, чтобы результат был максимально точным. Мочу следует собирать в утреннее время суток натощак или через 2-3 часа после приема пищи. Желательно сделать это сразу после сна.

Расшифровка анализа ПЦР

После проведения теста результаты оцениваются и аппаратурой, и специалистами-медиками.

«В конце теста машина сообщает, что она нашла в мазке, а врач-лаборант описывает результат, – объяснил эксперт. – Если в программу машины заложена информация о том, при каких количествах считается тест положительным, значит, это будет делать автомат. В анализе будет либо да, либо нет. Самому человеку ничего расшифровывать не нужно, единственное, что специалист может посмотреть за машиной – это количество кусочков РНК, потому что бывают ложноположительные или ложноотрицательные результаты, если в аппарате произошел сбой. Все равно контроль со стороны врача присутствует».

Насколько точна ПЦР-диагностика инфекций

«ПЦР абсолютно точна, практически 99,9%, потому что аппарат построит абсолютно такую же РНК, как слепок с ключа, один в один. Там ничего нового сделать нельзя. Набор частичек увеличивается до того количества, которое может распознать машина. Сделать это можно, даже если частиц очень мало», – отметил Андрей Кондрахин.

При этом из-за того, что зачастую встречаются ошибки при взятии биологического материала и существует вероятность попадания инородных частичек, могут возникать ложноположительные или ложноотрицательные результаты тестирования на коронавирус.

Как определяют отцовство по ДНК

Под "генетическим материалом" обычно имеется в виду кровь или соскоб защёчного эпителия (делается ватной палочкой). Не-обычно, но довольно часто в лабораторию приносят:

  • слюну,
  • сперму,
  • пятна засохшей спермы на ткани,
  • пятна засохшей крови на ткани,
  • несколько волос, вырванных с корнем. Возможны и другие, ещё более экзотичные варианты (зубы, ногти, окурки, зубные щетки, жвачки), но это выйдет дороже.

Стоимость анализа – 10-15 тысяч рублей.
Срок анализа – одна-две недели.

  • либо 99.99%, что отец (100% достичь нельзя),
  • либо 100%, что не отец (а тут – можно).

Как всё это связано со школьным курсом генетики

  • Ген – это участок ДНК, отвечающий за определенный признак. Например, существует ген цвета волос.
  • Каждый ген в природе представлен несколькими вариантами – аллелями. Например, у гена цвета волос бывает два аллеля – темный и светлый.
  • У каждого человека каждый ген имеется в двух экземплярах – один ген получен от матери, второй – от отца.

Для определения отцовства биологи подобрали специальные хитрые гены, имеющие не по 2, а сразу по 10 аллелей. Хитрость получилась о двух концах: определять такие аллели гораздо сложнее, чем просто посмотреть глазами на светлые или темные волосы. Придется в хорошей лаборатории на дорогом оборудовании проводить полимеразную цепную реакцию (ПЦР) и электрофорез в полиакриламидном геле (а потом смотреть на светлые или темные полосы)).

  • Колонка "калибровка" на этой и следующих фотографиях показывает ВСЕ исследуемые аллели (варианты) гена. У гена TPOX, как видим, исследуется 6 аллелей. Не 10, конечно, но тоже много.
  • Название аллелей, например, "9", связано с длиной соответствующего гена. Ген "8" самый короткий, "12" – самый длинный.
  • Ребенок имеет две аллели гена TPOX – один от матери (10-ый), один от отца (9-ый).
  • Мать тоже имеет две аллели – один от своей матери (бабушки ребенка), один от своего отца (дедушки ребенка).
  • Отец от своего отца получил 9-ый аллель и от своей матери получил 9-ый аллель, поэтому у него только он один.
Читайте так же:
Могут Ли Приставы Забрать Имущество По Месту Регистрации

Маркёр TPOX

Результат исследования по маркёру TPOX: и у отца, и у ребенка имеется 9-ый аллель. Получил ли ребенок одну аллель от отца, как мы ему повелели? – Получил. Следовательно, предполагаемый папа может быть отцом данного ребенка.

Может, но не обязательно является. 9-ый аллель гена TPOX имеется у каждого одиннадцатого жителя РФ (вероятность 1/11), ребенок мог получить девятый Тпокс от кучи народа. Надо проводить дополнительный анализ по другому маркёру.

Маркёр D8S1179

У предполагаемого отца обнаружены 10-ый и 12-ый аллели гена D8S1179.
У мамы – 13-ый аллель.
У ребёнка – 12-ый и 13-ый аллели.

У ребенка есть "отцовский" 12-ый аллель, отцовство всё еще подтверждается.

12-ый аллель гена D8S1179 имеется у каждого шестого жителя РФ. Вероятность совпадения девятого ТПОКСа и двенадцатого ДЭ-ВОСЕМЬ-ЭСа вычисляем путем перемножения 1/11 (TPOX) на 1/6 (D8S1179). Получаем полтора процента (0,015). Всё еще многовато, берём следующий маркёр.

Маркёр D13S317

У предполагаемого отца обнаружены 8-ой и 11-ый аллели гена D13S317.
У матери – 9-ый и 11-ый.
У ребёнка – 8-ой и 9-ый.

У ребенка есть "отцовский" 8-ой аллель, отцовство снова не исключается.

8-ой аллель D13S317 имеется у 15-и из ста жителей РФ (у одного из 6,5 человек). Перемножаем: 1/11 х 1/6 х 15/100 = 0,0023. Это примерно одна четырестасороковая. Т.е. комбинация "9-ый TPOX, 12-ый D8S1179 и 8-ой D13S317" встречается у одного человека из 440.

Надеюсь, принцип понятен. Еще парочка маркеров, и вероятность комбинации с 0.0023, на которой мы остановились, дойдет до 0.0003. А это будет 99.97% вероятность отцовства – вполне достаточно для того, чтобы ревнивый папаша, подогреваемый своей многоумной мамашей, перестал уже доставать ангела-жену своими грязными подозрениями.

Другая семья, маркёр D7S820

У предполагаемого папы обнаружен 10-ый и 13-ый аллели гена D7S820.
У ребенка – 11-ый и 12-ый.
У мамы – 8-ой и 12-ый.

Результат исследования: отец должен был отдать своему ребенку либо 10-ый, либо 13-ый аллель D7S820. Но у ребенка нет ни того, ни другого. В сперматозоиде, породившем данного ребенка, находился, судя по картинке, 11-ый аллель. Который у "передполагаемого папы" отсутствует. Вывод: "предполагаемый папа" не является биологическим отцом ребенка.

Можно, конечно, и здесь провести исследование по другим маркерам – и их, безусловно, проводят. Обычно работу останавливают, когда отцовство опровергается тремя разными маркерами. Зачем дальше тратить дорогие реактивы? Всё понятно: не отец, 100%.

Сколько стоит тест ДНК на отцовство

При рассмотрении дел об отцовстве, о его установлении либо оспаривании, судьей принимаются любые доказательства, представленные сторонами спора. Но на практике, без достоверных результатов генетических исследований определить фактического отца ребенка достаточно сложно. Следовательно, судами без таких доказательств выносятся отрицательные вердикты, зачастую руководствуясь только интересом ребенка.

Поэтому генетические исследования пользуются популярностью при отстаивании правомочий на установление отцовства либо оспаривании такового, независимо от их высокой стоимости.

Средняя стоимость таких анализов может достигать 20 тысяч рублей.

Альтернативные бесплатные методы установления отцовства

Существует несколько альтернативных способов установления отцовства:

  1. по внешним признакам (оценивается внешнее сходство ребенка и предполагаемого родителя);
  2. по группе и резус-фактору крови (при помощи специальных таблиц производится анализ группы крови и резус-фактора ребенка и родителей);
  3. дате зачатия;
  4. по наличию определенных генетических заболеваний и предрасположенностей (по наличию генетических заболеваний, передающихся от родителей ребенку, можно с достаточной степенью точности сделать вывод о степени родства).
Читайте так же:
Как проходит бракоразводный процесс в суде

Исходя из написанного выше, можно сделать вывод, что тест ДНК является единственным способом со стопроцентной вероятностью определить степень родства. Иные же способы являются неточными и в большинстве случаев судом во внимание приняты не будут.

  • Материал можно взять обычными палочками или приобрести набор для теста ДНК
  • Договор.
    Образец договора анализа на отцовство
  • Оплату можно произвести наличными в нашем центре, через любой банк и банковской картой на сайте.
    Реквизиты для оплаты
  • Результат будет предоставлен по вашему желанию: лично в руки, по телефону, по электронной почте, заказным письмом почтой, или курьерской службой.

В случае, если анализ нужен для судов США, Европы и других стран, можно делать юридический анализ.

В случае, если анализ необходим для использования в посольстве или суде, необходима идентификация личности. Для этого необходимо взять с собой для каждого участника: паспорт или свидетельство о рождении участников.

Возможно провести такой анализ дистанционно, нам передаются запечатанные образцы с протоколом забора материала. Процедура юридического анализа

Образцы для сдачи анализа ДНК

Самым распространенным образцом стандартного вида является слюна, собранная со слизистой оболочки рта специальной палочкой. Точность анализов из такого биоматериала максимально высокая и составляет 99,99%.

К нестандартным биологическим образцам относят:

  • Фрагменты одежды, которые соприкасались с телом (манжеты, воротник);
  • Ногти (от 3 штук взрослого человека и со всех пальцев ребенка);
  • Окурки (от 1 шт. с минимальными загрязнениями);
  • Жевательная резинка (от 1шт., желательно не брать образец руками);
  • Волосы с волосяными луковицами (от 6−12 образцов, только с корешками);
  • Презерватив с биоматериалом;
  • Одноразовые столовые приборы, трубочки (обязательно ими должен был пользоваться только один человек);
  • Лезвия бритв (не промытые водой);
  • Зубы (можно молочные). Результат будет существенно точнее, если на зубе остались частицы крови и слюны;
  • Соска — пустышка (не промытая);
  • Сперма (пятно спермы более 1 кв.см. на ткани или бумаге, или на ватных палочках изнутри презерватива);
  • Костная ткань;
  • Иные личные гигиенические и столовые принадлежности.

Где проводят исследование

Генетическая экспертиза отцовства

Генетическая экспертиза отцовства

ДНК экспертиза / Генетическая лаборатория

Адрес: 454076 г. Челябинск,
ул. Варненская, 4-б,
кабинет 201
Тел. 8(351)723-03-05, доб. 213, 214
Часы работы: Пн-Пят с 09.00 до 15.30
Перерыв с 12.30 до 13.00

Зав. отделением Полюн Татьяна Михайловна

Установление отцовства и установление родства по мужской линии может быть произведено:

  • в судебном порядке при рассмотрении гражданских дел о взыскании алиментов, наследовании имущества, а также в других ситуациях, требующих доказательства или опровержения факта родства (в частности, отцовства)
  • в частном порядке

Информация о проведении генетической экспертизы в ГБУЗ ЧОБСМЭ:

  1. В нашей лаборатории проводится установление отцовства ( отцовство по ДНК ) с 1994 года.
  2. Наше бюро – единственное в Челябинской области государственное судебно-экспертное учреждение, имеющее выданную в установленном порядке лицензию на судебно-медицинскую генетическую экспертизу.
  3. Все исследования производятся непосредственно в нашей лаборатории квалифицированными государственными судебными экспертами, прошедшими обучение в головном экспертном учреждении – Российском центре судебно-медицинской экспертизы Минздравсоцразвития РФ.
  4. Генетическая экспертиза производится в строгом соответствии с положениями, предусмотренными ГПК РФ, федеральным законом от 31.05.2001 № 73-ФЗ «О государственной судебно-экспертной деятельности в Российской Федерации», нормативно-правовыми актами Минздрава РФ. Согласно статье 307 УК РФ наши эксперты несут уголовную ответственность за дачу заведомо ложного заключения.
  5. В нашей лаборатории вероятностная оценка подтверждения отцовства варьирует от 99,90% до 99,99999%. Исключение отцовства составляет 100%. Установление родства в отношении одного из родителей возможно и в отсутствие другого (заведомого) родителя, но в этом случае при подтверждении родства рассчитанная вероятность может оказаться несколько ниже, чем при участии в исследовании обоих родителей.
  6. Выполненные нами экспертизы иногда перепроверяются в экспертных учреждениях других регионов страны; при этом результат всегда один – подтверждение нашего исследования.
  7. Мы гарантируем Вам полную анонимность и конфиденциальность наших исследований.
  8. Забор материала производится в лаборатории с 9-11 часов.
    1. Чтобы провести ДНК тест вместо неприятной процедуры забора крови, мы берем у детей и взрослых образцы щечного эпителия. Процедура забора биоматериала безболезненна и занимает не более 3 минут. Для этого достаточно потереть по внутренней стороне щеки специальным тампоном-аппликатором. По желанию возможен забор крови.
    2. Для исследования по частной инициативе необходимо одновременное присутствие всех участников экспертизы с документами, удостоверяющими личность (в случае предоставления в дальнейшем результатов исследования в суд). Если Вы хотите провести исследование для себя, то можно принести биоматериал (ногти, кровь, щечный эпителий на ватной палочке) интересующих участников исследования в лабораторию. В этом случае достаточно иметь при себе паспорт лицу, заключающему договор на проведение генетического исследования с нашим учреждением.

    Стоимость ДНК экспертизы:

    • Стоимость стандартной экспертизы (отец — ребенок — мать или отец — ребенок) 22 900 рублей по договору с ГБУЗ ЧОБСМЭ на условиях предоплаты, установление родства по мужской линии — 28 900 рублей.
    • При назначении экспертизы судом возможно также предварительное перечисление средств на расчетный счет управления Судебного департамента в порядке, предусмотренном ч.1 ст.96 ГПК РФ.
    • В назначенный день с 9 до 11 часов все участники экспертизы, назначенной судом, одновременно прибывают в ГБУЗ ЧОБСМЭ с определением суда и документами, удостоверяющими личность (паспорт РФ, свидетельство о рождении ребенка). Материалы дела не требуются.
    • Ограничений по возрасту ребенка не существует.

    Дополнительную информацию Вы можете получить по телефону 8(351)723-03-05, доб. 213, 214 .

    Что такое ДНК

    ДНК была открыта Иоганном Фридрихом Мишером в 1869 году. В 1953 году Френсис Крик и Джеймс Уотсон предложили структурную модель ДНК.

    ДНК- это сокращенное название дезоксирибонуклеиновой кислоты. Благодаря ее длинной полимерной молекуле осуществляется хранение, передача из поколения в поколение и реализация генетической программы развития и функционирования организма. ДНК нередко сравнивают с набором чертежей для сборки живого организма. Молекула ДНК представляет собой двойную цепь, закрученную в спираль. Звеньями цепи ДНК являются последовательно расположенные нуклеотиды.

    У человека ДНК отделена от других структур клетки и располагается главным образом в ядре в виде упорядоченных структур – хромосом. В человеческом ядре содержится 46 хромосом. От матери и отца мы получаем поровну, по 23 хромосомы.

    ДНК не изменяется в течение жизни, все ткани нашего организма содержат одну и ту же копию ДНК. Это позволяет сравнивать между собой образцы ДНК, полученные в разные периоды жизни человека и разного биологического материала.

    Установление отцовства основывается на законах наследования, согласно которым в генотипе ребенка обязательно должны присутствовать аллельные варианты, наблюдаемые у обоих родителей.

    Отцовство исключается, если в локусах предполагаемого отца и ребенка не содержится общих аллелей.

    Полученные данные подвергаются математической обработке, осуществляется вероятностные подсчеты исходя из частоты встречаемости каждого аллеля в человеческой популяции.

    Вывод об исключении отцовства делается в категорической форме — 100%-ное исключение отцовства.

    В случаях подтверждения отцовства вероятность его бесконечно приближается к 100% по мере увеличения исследованных локусов. 100%-ное подтверждения отцовства невозможно из теоретических соображений, поскольку для достижения 100%-ной вероятности отцовства потребуется исследование генотипов всех мужчин на планете Земля.

    голоса
    Рейтинг статьи
Ссылка на основную публикацию
Adblock
detector